Erkek germ hücrelerinin morfolojisinin farklı histolojik boyalarla ışık mikroskobu düzeyinde incelenmesi

Abstract

SÜ Meram Tıp Fakültesi Tüp Bebek Ünitesine infertilite ön tanısı ile gelen hastaların spermiyogramları yapıldıktan sonra hastanın semen numunesinden 1-1.5 cc alınıp numuneye iki kez yıkama işlemi gerçekleştirildi. Pellet 0.2 ml medyumla karıştırılıp lam üzerinde yaymaları yapıldı. Oda sıcaklığında kurutulup absolu metil alkolde tespit edildi. Her bir hasta için; Hematoksilen-Eozin, Toluidin Blue, Giemsa, Wright, Weigert'in Demirli Hematoksilen boyası, Orange G Boyası, Anilin blue boyası, Shorr metodu, Papanicalou boyası, Light Green boyası, Akridine Orange boyası ve Janus Green boyası ile boyama işlemi uygulandı Boyanmış preperatlar IM'de 100'lük objektifte incelenip, boyaların spermatozoanın baş, orta parça ve kuyruk kısmını nasıl boyadığı değerlendirildi. Bulguların mikrofotografları alındı Çalışmamızın ikinci bölümünde, normozoospermili 10 hastanın H-E, T.Blue, Shorr ve Papanicolau ile boyanmış preperatları değerlendirildi. Her bir preperatta Kruger strick kriterleri esas alındı. 200 adet normal morfolojili spermatozoa hücresinde; baş uzunluğu, baş genişliği, orta parça uzunluğu ve kuyruk uzunluğu olmak üzere 4 parametrede mikrometre yardımıyla ölçümleri yapıldı. Bu ölçümler sonrası tek yönlü varians analizi ANOVA) ve Post hoc Tukey HSD testi ile istatiksel analiz yapılarak hangi boyanın spermatozoa morfolojisini daha iyi gösterdiği ve Kruger strick kriterlerine daha uygun olduğu belirlenmeye çalışıldı H-E ile boyamada spermatozoa morfolojisi özellikle spermatozoa baş orta parça ve kuyruk kısmı net görüldü. Kondansasyon oldukça iyi görüldü. H-E boyasının spermatozoanın genel morfolojik değerlendirmesi için ideal bir boya olduğu görüşüne ulaştık. T. Blue ile boyamada spermatozoa başındaki kondansasyon iyi seçiliyordu. Spermatozoa orta parçası ve kuyruğu boyandı. Orta parça iyi seçilemiyordu ve spermatozoa morfolojisi değerlendirilebiliyordu. Giemsa ile boyama sonrası spermatozoa baş morfolojisi ve kondansasyon iyi görülüyordu. Fakat orta parça ve kuyruk net seçilemiyordu. Wright boyası ile spermatozoa baş morfolojisi ve kondansasyonu iyi seçilebiliyordu. Orta parça ve kuyruk soluk boyanmış idi. Weigert'in Demirli Hematoksilen Eozin boyası ile spermatozoa başında kondansasyon iyi görülebiliyordu. Baş, orta parça çok net değerlendiriliyor ve kuyruklar net seçilebiliyordu. T. blue ile boyanmış spermatozoalarda özellikle baş uzunluğunda anlamlı farklılık görüldü. Aynı şekildeki değerlendirmeler diğer boyalarlada yapıldı Çalışmanın ikinci bölümünde bu dört boya grubuna göre ölçümü yapılan spermatozoaların değerlendirilmesinde bütün ölçümlerde anlamlı farklılıklar çıktı. En küçük değerler T. Blue boyasına ait idi. Shorr boyası ile Papanicolau boyası ölçümleri birbirine yakın olmakla birlikte en büyük değerler Papanicolau boyasına ait idi. Bu çalışmadaki istatiki anlamlılık seçilen boya ile değişebilmektedir, sonucuna varıldı.

After routine spermiogram was done, to the patients in SU. Meram Med. Fac. IVF Unit, 1-1,5 cc seminal plasma samples were taken and o seperate swim up procedure was preperad. The pelled was homogenated with 0,2 ml medium and smear samples were prepared. Smears were dried in room temperature and fixed with absolute alcohol. For each patient staining was performed with Haematoxylin-Eosin, Toluidin Blue, Giemsa, Wright, Weigert?s Iron Haematoxylin, Orange G, Aniline blue, Shorr, Papanicalou, Light Green , Acridine Orange and Janus Green stains Stained slides were evaluated under x100 objective magnification with light microscopy. Stain and spermatozoa head, midpiece and tail reaction was under inspection and photomicrographs were taken for this aim The second part of our study was based on 10 patients who had normospermatozoa, their seminal samples were stained with H-E, T. Blue, Shorr and Papanicolau. In this part we made strict Kruger analysis on the samples. For each sample human spermatozoa was evaluated with micrometer, for head lenght- width, middle piece and tail lenght. The results were evaluated with statistical analysis ( ANOVA, Post Hoc Tukey HSD) to reveal which stain was proper for Kruger?s Strict Criteria with H-E spermatozoa head, midpiece and tail morphology was clearly identified. Condensation was also clearly identified. H-E stain was considered to be suitable for general parameters of spermatozoa T.Blue revealed condensation more spesifically. Midpiece stained poorly general morphology was quite good for inspection. With Wright stain head morphology and condensation was satisfactory, midpiece and tail stained poorly. With Weigert?s Iron H-E head and condencation stained good, also midpiece and tail was suitable. Other previously mentioned stains were evaluated in the same manner The second part of our study revealed significant difference on spermatozoa head lenght when stained with T. Blue We revealed that different stains can give different statistical results.