Bu tez çalışmasında çeşitli serumsuz besi yeri ortamlarında, mikro taşıyıcılı hücre kültürü teknolojisi kullanılarak bovine rotavirusun üremesi incelenmiştir. Çalışmada, PET (Polipropilen örgülerle desteklenmiş) Fibra-cel® disk taşıyıcılar üzerinde üretilen MA 104 hücre kültürü ve bovinerotavirus(BRV) Grup A-B223 VR-1290 kullanılmıştır. Çalışmanın ilk aşaması durgun ortamda, Fibra-cel® diskli ve disksiz 24 gözlü TCPS kaplarında gerçekleştirilmiştir. Toplam hücre sayısı ve özgül üreme hızının belirlenmesi için hemositometrik yöntem ve MTT analizi kullanılmıştır. Ayrıca, glikoz tüketimi ve laktat üretimi saptanmıştır. Çalışmanın ikinci aşaması 0,5 L ve 10 L çalışma hacimli biyoreaktörde gerçekleştirilmiştir. Çalışmalarda başlangıç hücre sayısı, taşıyıcı konsantrasyonu ve kültür süresinin hücre ve virus verimi üzerindeki etkileri araştırılmıştır. Kültürdeki hücre sayıları indirek yöntemler kullanılarak tahmin edilmiştir. Bu amaçla besiyerinin kimyasal analizleriyle glikoz ve laktata ait özgül hızlardan yararlanılmış ve ayrıca hücrelerin üremeleri hücre boyama ile gözlenmiştir. Çalışmada serumsuz vasatta hücre ve virüs üretimin serumlu besi yerleriyle karşılaştırıldığında paralel sonuçlar elde edildiği görülmüştür. Ayrıca serumsuz vasatlarda serum içerenlere göre daha fazla sayıda hücre elde edilmiş ve virüs titresinde de buna bağlı olarak daha yüksek titre elde edilmiştir. Çalışma sonunda mikrotaşıyıcılı, serumsuz besi yeri içeren kültürlerde bovine rotavirus üretiminin daha az işçilik ve malzeme maliyeti olan, kontaminasyon riski düşük ve yüksek verimde gerçekleştirilebileceği saptanmıştır ve bu ön çalışma endüstriyel ölçekli üretime yol gösterecektir.
In this study, the production of bovine rotavirus (BRV) was investigated in the serum-freemedia by the micro carrier cell technology. Forth is purpose, MA- 104cellculture growing on Fibra-cel® discs and bovine rotavirus(BRV) Grup A-B223 VR-1290 were used. The first part of the study was conducted in stationary cultures using 24-well TCPS plates in the presence and absence of Fibra-cel® discs. MTT staining was used forthe quantitative estimation of total cell number and the specific growth rate. Also, the average specific glucose consumption and lactate production rates were calculated. These second part of the study, were carried out in the bioreactor which has 0,5 Land 10 L working volume. The effects of initial cell density, microcarrier concentration and incubation time on cell and virüs yields were investigated. The cell yield was estimated by indirect methods. Indirect methods of cell estimation involve the chemical analysis of a culture media for glucose and lactate concentrations and cell dye. It was seen that cell and virus production in serum-freemedia were compatableas compared with the media including sera. Furthe rmore, this method also provide high-yield production of bovine rotavirus with advantages of reduction in the cost of laborand materials, easy-to-operate, low contamination risk and hightiter.
