Farklı fonksiyonel grupları taşıyan p-ter bütilkaliks[4]aren nanofiberlerinin caco-2 kolon kanseri hücreleri üzerine etkisinin incelenmesi

Abstract

Bu tez çalışmasında Nitril (-CN), Amin (-NH2), Karboksilik asit (-COOH) ve Alkil Bromür (-Br) taşıyan p-ter-bütilkaliks[4]aren molekülleri uygun reaksiyon şartlarında sentezlendi ve bu sentezlenen p-ter–bütilkaliks[4]aren türevlerinin elektrospin yöntemi ile nanofiberleri oluşturuldu. Sentezlenen bu makrosiklik bileşiklerin yapıları spektroskopik teknikler (FTIR, 1H-NMR), nanofiberin yüzey analizleri SEM, tekniği kullanılarak aydınlatıldı. Yüzeylerine Caco-2 hücresi 15x104 olacak şekilde sayılarak ekilen Nitril (-CN), Amin (-NH2), Karboksilik asit (-COOH) ve Alkil Bromür (-Br) ) taşıyan p-ter-bütilkaliks[4]aren nanofiber numuneleri 72 saat inkübasyon sonrasında nanofiberler çekilerek yeni 24 kuyucuklu plakaya aktarılarak kuyucuklara 500 mikrolitre DMEM ve 250 mikrolitre XTT (2,3-Bis-(2-Methoxy-4-Nitro-5-Sulfophenyl)-2H-Tetrazolium-5-Carboxanilide)(Biological Industries) olacak şekilde eklendi. XTT eklendikten 5 saat sonra 24 kuyucukların bir kısmı XTT analizi için 96 kuyucuklara aktarılıp diğer kısmı ise tamponu uzaklaştırıldıktan sonra 2 kez steril distile su ile yıkanılıp son steril distile su çekilerek -80 °C'ye 1 gece bekletilmek üzere derin dondurucuya konulmıştır. Ertesi gün -110 °C' ye kadar soğutan liyofilizatörde 1 gece boyunca dondurulup kurutulmuştur. Kurutulan numuneler üzerindeki hücreler SEM analizi öncesi numunenin 5 nm AuPd ile kaplanması sağlanmıştır. Daha sonra SEM'de incelenerek yüzeyde tutunup çoğalan hücreler (100X, 5000X, 1000X, 2000X, 5000X, 10000X) büyütmelerde görüntülendi.

In the present study, molecules of p-tert-butylcycles [4] arene bearing Nitrile (-CN), Amine (-NH2), Carboxylic acid (-COOH) and Alkyl Bromide (-Br) were synthesized under suitable reaction condition and the synthesized p- butylcarlix [4] aren derivatives were formed by electrospinning method. Structures of these synthesized macrocyclic compounds were characterized by spectroscopic techniques (FTIR, 1 H-NMR), nanofiber structure analysis SEM technique. Samples of p-tert-butylcarboxy [4] arene nanofibers bearing Nitril (-CN), Amine (-NH2), Carboxylic acid (-COOH) and Alkyl Bromide (-Br), counted as Caco-2 cells 15x104, After incubation, the nanofibers were withdrawn and transferred to new 24-well plates and 500 μL of DMEM and 250 μL of XTT (2,3-Bis- (2-Methoxy-4-Nitro-5-Sulfophenyl) -2H-Tetrazolium-5-Carboxanilide) (Biological Industries) were be added. After 5 hours of XTT being added, some of the 24 wells are transferred to 96 wells for XTT analysis and the other part were removed from the buffer, then washed twice with sterile distilled water and the final sterile distilled water is added to the freezer for 1 night at -80 oC. The next day, it was frozen and dried overnight in a lyophilizer cooled to -110 °C. The cells on the dried specimens were coated with 5 nm AuPd before the SEM analysis. Subsequently, the cells were observed by SEM and enlarged (100X, 5000X, 1000X, 2000X, 5000X, 10000X).