KML (Kronik Miyeloid Lösemi), Ph kromozomu ve BCR/ABL füzyon geninin bulunmasıyla karakterize bir lösemi tipidir. Bu anomali ALL (Akut Lenfoblastik Lösemi)'li çocuklarda da gözlenmektedir. BCR/ABL füzyon geni, kromozom 9 ile 22 arasında karşılıklı translokasyon sonucu oluşmaktadır. ABL ve BCR genleri üzerindeki kırılma noktası değişebilmektedir. Bu nedenle değişik moleküler kütlelere sahip füzyon protein kinaz ürünleri meydana gelmektedir. Hastalarda BCR/ABL gen füzyonunun yanı sıra ABL ve BCR genlerinde farklı yapıda büyük delesyonlar ve mutasyonlar rapor edilmiştir. Bu delesyonların, hastanın prognozu ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. Bu genler üzerindeki mutasyon tiplerinin de belirlenmesi, tanı sonrası tedavi ve tedavi takibinde, tedaviye yanıt için önemlidir. KML ve ALL'li hastalarda direncin erken dönemde tanımlanması ve optimal tedavi şeklinin belirlenmesi açısından önemi bilinmektedir. Bu çalışmada, t(9;22) translokasyonu mevcut, sitogenetik ve/veya BCR/ABL füzyon analizi için fluoresan ın situ hibridizasyon (FISH) sonuçları olan 67 hastanın PZR-RFLP metoduyla BCR/ABL füzyon genindeki mutasyonlar analiz edilmiştir. Pozitif kontrol olarak Philadephia (+) hücre hattı K562, negatif kontrol olarak da Burkitt Lenfoma hastalarından elde edilen Philadephia (-) hücre hattı olan Raji kullanılmıştır. Nokta mutasyon analizi için vakaların kan ve/veya kemik iliği örneklerinden izole edilen BCR/ABL füzyon RNA'sı üzerinde toplam 5 mutasyon incelenmiştir. 67 hastadan 14'ünde mutasyon tespit edilmiştir. Bunlar; 7 hastada F317L, 3 hastada F311I, 2 hastada M351T, 1 hastada T315I ve 3 hastada da F359V mutasyonlarıdır. Bununla birlikte iki hastanın birinde M351T ve F317L mutasyonu, diğerinde ise T315I ve F317L mutasyonları tespit edilmiştir. İlaçlara direncin moleküler temelinin anlaşılabilmesi için özellikle BCR ve ABL genlerindeki mutasyonların daha ayrıntılı ve geniş populasyonlarda araştırılması gerekmektedir. Sonuç olarak, en uygun tedavi şeklinin belirlenmesi açısından, KML ve ALL'li hastalarda mutasyon tipinin belirlenmesiyle, mutasyona uygun tedavi şeklinin planlanmasına katkı sağlanacağı düşünülmektedir. Anahtar Sözcükler: Lösemi; KML ve ALL; BCR/ABL; Philadephia kromozomu; PZR-RFLP
Investigation of Mutations in ABL and BCR Gene in BCR/ABL Transcript of Patients with ALL and CML Chronic Myelogenous Leukemia (CML) is characterized as a presence of the BCR/ABL gene fusion or Ph chromosome. This abnormality also can be seen in children with acute lymphoblastic leukemia (ALL). The BCR/ABL fusion gene is a result of reciprocal translocation between chromosomes 9 and 22. The break points can be changed on BCR and ABL genes. Therefore, the products of fusion gene are different molecular weights. Different size deletions, mutations are seen in ABL and BCR genes along with the presence of the BCR/ABL fusion gene. These deletions are associated with patient's prognosis. Determination of certain mutations in these genes is considered as a indicator for diagnosis, treatment and follow up treatment response. To acquisition optimum treatment manners, considering to porminence of early identification of resistance in CML patients, accurate determining of the mutation types is useful for apply a reasonable treatment. In this study, 67 patients with t(9; 22) translocation and BCR/ABL fusion gene mutations was analized by using PCR-RFLP technique. Cell line K562 and cell line Raji (Burkitt Lymphoma) were used for Philadelphia positive and negative controls, respectively. RNA was isolated from peripheral blood or bone marrow samples of patients with either CML or ALL. A total five mutations were examined on BCR/ABL transcript by using PCR-RFLP technique. These mutations are F317L, F311I, M351T, T315I and F359V. Fourteen of 67 patients showed these mutations either alone or along with other mutations. This mutations include F317L in 7 patients, F311I in 3 patients, M351T in 2 patients, T315I in one patient and F359V mutations in 3 patients and also M351T and F317L in one patient, T315I and F317L in the other patient. As a conclusion, in order to determine the best treatment protocol, the mutation types on BCR/ABL transcript is very important. This may help suitable treatment protocol for both classic and new generation tyrosine kinase inhibitors, treatment, follow up the patients with BCR/ABL positive patients during the therapy. Key Words: Leukemia; CML and ALL; BCR/ABL; Philadephia chromosome; PCR-RFLP
