Tavşanlarda paklitaksel'in spermatolojik parametreler, testis histolojisi ile fertilite üzerine etkileri ve resveratrol'ün koruyucu özelliğinin belirlenmesi

Abstract

Kemoterapötiklerin fertilite üzerine olumsuz etkileri bilinmektedir. Bu çalışmada antikanser ilaçların infertilite üzerine oluşturduğu olumsuz etki ve bunun üzerine antioksidan maddenin koruyucu etkinliği olup olmadığı spermatolojik parametreler, oksidatif stres değerleri ve histopatolojik yöntemler ile değerlendirildi. Sunulan çalışmada antikanser bir ajan olan paklitaksel ve antioksidan resveratrol'ün Yeni Zelanda ırkı tavşan sperması üzerine etkileri araştırıldı. Deney, her grubu 8 Yeni Zelanda tavşanından oluşan 4 grup olacak biçimde dizayn edildi. Kontrol grubuna 40 ml serum fizyolojik uygulaması yapıldı. Paklitaksel grubuna 40 ml serum fizyolojik içerisinde 5mg/kg dozunda paklitaksel, resveratrol grubuna 40 ml serum fizyolojik içerisinde 4 mg/kg dozunda resveratrol, paklitaksel+resveratrol grubunda ise 40ml lik serum fizyolojik içerisinde 5 mg/kg paklitaksel + 4 mg/kg resveratrol uygulaması yapıldı. Tüm uygulamalar 8 hafta boyunca haftada bir defa İ.V. yolla yapıldı. Ejakülatlar 11 hafta boyunca alındı. Sperma motilitesi faz-kontrast mikroskop ile değerlendirildi. Sperma membran bütünlüğü, akrozom bütünlüğü ve mitokondriyel aktivite oranları sırasıyla SYBR 14/PI, FITC-PNA ve JC-1/PI boyama ile değerlendirildi. Sperma ve testis dokusunda LPO, tGSH ve total antioksidan kapasite seviyeleri sperktrofotometre ile belirlendi. Onbirinci haftada 32 dişi tavşan kullanılarak fertilite denemesi yapıldı. Fertilite denemesi sonrasında erkek tavşanlara ötenazi uygulandı ve tüm tavşanların testisleri alınıp tubul çapları ölçüldü. Spermatolojik analizler sonucunda paklitaksel'in sperma üzerine olan hasarlarını resveratrol'ün önlediği görülmüştür. Paklitaksel sperm motilitesini, yoğunluğunu, canlılığını, akrozom bütünlüğünü ve mitokondriyel aktivitesini azaltmış (P<0.05), resveratrol ise bu hasarları engellemiştir. Biyokimyasal olarak sperm ve testis dokusu LPO, tGSH ve AOP değerlerinin paklitaksel tarafından olumsuz etkilendiği, resveratrol uygulamasının koruyucu özellik gösterdiği görülmüştür (P>0.05). Histopatolojik değerlendirme sonucunda paklitaksel uygulamasının seminifer tubul çapı ölçülerini daralttığı (P<0.05) ve resveratrol uygulamasının paklitaksel'in negatif etkilerine karşı koruyucu etki gösterdiği belirlenmiştir. Fertilite denemesi sonucunda gruplar arasında istatistiksel farklılık gözlenmemiştir (P>0.05). Sonuç olarak paklitaksel'in bazı spermatolojik parametreler, biyokimyasal analizler ve seminifer tubul çapı ölçümü üzerine olumsuz etkisi olduğu belirlendi. Ayrıca resveratrol'ün paklitaksel'in negatif etkisine karşı koruyucu etkinliği olduğu tespit edildi.

It is known that chemotherapeutics have adverse effects on the fertility. In this study, the negative effects of the anticancer drugs on infertility and whether antioxidant substances have protective efficacy on this matter were evaluated by sperm parameters, oxidative stress levels and histological methods. In this study, the effects of anticancer drug paclitaxel and an antioxidant resveratrol on New Zeland Rabbit semen were evaluated. The experimental design consisted of four treatment groups. Each treatment group consisted of 8 New Zeland Rabbits. The control group was administered 40 ml saline, the paclitaxel group was administered 5mg/kg paclitaxel in 40ml saline, the resveratrol group was administered 4mg/kg resveratrol within 40ml saline and the paclitaxel+resveratrol group was administered 5mg/kg paclitaxel+4mg/kg resveratrol within 40 ml saline. All administrations were i.v. and continued once a week for 8 weeks. Ejaculates were collected for 11 weeks. Sperm motility was estimated using phase-contrast microscopy. Sperm viability, sperm acrosome integrity, and sperm mitochondrial activity were performed by staining with SYBR 14/PI, FITC-PNA, and JC-1/PI respectively. LPO, tGSH and antioxidant capasity levels were determined by spectrophotometry in semen and testes tissues. At the 11 th week, fertility trial was made by using 32 female rabbits. After fertility trial, male rabbits were euthanasiad. Additionally, at the end of 11 weeks, all rabbit's testes were removed and diameters of seminiferous tubules were measured. At the result of spermatological analyses, it was observed that the damages on sperm parameters induced by paclitaxel were normalised by resveratrol. While paclitaxel decreased sperm motility, concentration, viability, acrosome integrity, and mitochondrial activity (P<0.05) treatment with resverarol was removed these damages. As biochemically, although sperm and testis tissue LPO, tGSH, and total antioxidant capasity levels increased by paclitaxel, resveratrol treatment showed protective effect (P>0.05). Histopathologically it was observed that treatment of paclitaxel decreased diameters of seminiferous tubules (P<0.05) and treatment of resveratrol prevented negative effects of paclitaxel. In terms of fertility results, no significant difference was observed among the four groups (P>0.05). As a conclusion, the negative effects of paclitaxel was determined on some spermatological parameters, biochemical assays and diameters of seminiferous tubules. It was also determined that resveratrol prevented these negative effects of pacliaxel.